নমুনা প্রস্তুতি:
নমুনা সংগ্রহ: পরীক্ষার উদ্দেশ্য অনুযায়ী রক্ত, টিস্যু, লালা এবং প্রস্রাবের মতো নমুনা সংগ্রহ করুন।
ডিএনএ এক্সট্রাকশন: নমুনা থেকে ডিএনএ বের করতে একটি ডেডিকেটেড ডিএনএ এক্সট্রাকশন কিট ব্যবহার করুন।
পিসিআর প্রতিক্রিয়া প্রস্তুতি:
ডিজাইন প্রাইমারস: টেমপ্লেট ডিএনএর প্রশস্তকরণের জন্য লক্ষ্য ক্রমের ভিত্তিতে নির্দিষ্ট প্রাইমার জোড়া ডিজাইন করুন।
প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ প্রস্তুত করুন: টেমপ্লেট ডিএনএ, প্রাইমারস, বাফার, ডিএনএ পলিমেরেজ, ডিএনটিপিএস (ডিওক্সিনুক্লিওসাইড ট্রাইফোসফেটস), এমজি 2+, ইটিসি সহ
পিসিআর প্রোগ্রাম সেট করুন:
পিসিআর ইনস্ট্রুমেন্ট সেটিংস: প্রিসেট পিসিআর চক্রের পরামিতিগুলি লিখুন, যেমন 95 ডিগ্রি প্রিহিটিং তাপমাত্রা, অবনতি তাপমাত্রা (যেমন 95 ডিগ্রি), অ্যানিলিং তাপমাত্রা (যেমন 55 ডিগ্রি), এক্সটেনশন তাপমাত্রা (যেমন 72 ডিগ্রি) এবং চক্রের সংখ্যা।
পিসিআর প্রতিক্রিয়া:
নমুনা যুক্ত করুন: পিসিআর প্রতিক্রিয়া ট্যাঙ্ক বা চিপে প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি যুক্ত করুন এবং প্রতিটি নমুনায় সাধারণত একটি প্রতিক্রিয়া ভাল থাকে।
পিসিআর সম্পাদন করুন: হিটিং, কুলিং, অ্যানিলিং এবং এক্সটেনশন পদক্ষেপগুলি সহ প্রিসেট প্রোগ্রাম অনুযায়ী পিসিআর ইনস্ট্রুমেন্ট সাইকেলগুলি।
পণ্য বিশ্লেষণ:
প্রশস্তকরণের পরে কুলিং: পিসিআর শেষ হওয়ার পরে, নমুনাটি সংক্ষিপ্তভাবে 4 ডিগ্রীতে শীতল করা হয়।
ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিচ্ছেদ: বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের পিসিআর পণ্যগুলি পৃথক করতে জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস প্রযুক্তি যেমন আগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করুন।
ফ্লুরোসেন্স স্ক্যানিং: ফ্লুরোসেন্টলি লেবেলযুক্ত প্রাইমারগুলি প্রশস্ত পণ্যটিতে একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলো নির্গত করে এবং পিসিআর ইনস্ট্রুমেন্টটি এই সংকেতগুলি পড়ে এবং সেগুলি রেকর্ড করে।
ডেটা প্রসেসিং এবং ব্যাখ্যা:
ডেটা বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার: ফ্লুরোসেন্ট সিগন্যাল বিশ্লেষণ করতে এবং লক্ষ্য খণ্ডের ঘনত্ব বা আপেক্ষিক ঘনত্ব গণনা করতে বিশেষ সফ্টওয়্যার ব্যবহার করুন।
ফলাফলের ব্যাখ্যা: পিসিআর বক্ররেখা এবং বেসলাইনের উপর ভিত্তি করে, পিসিআর সফল হয়েছে কিনা, লক্ষ্য খণ্ডটি বিদ্যমান কিনা এবং এটি কতটা তা নির্ধারণ করুন।
ফলাফল রেকর্ডিং এবং সংরক্ষণ:
পরীক্ষামূলক প্রতিবেদনে ফলাফলগুলি রেকর্ড করুন এবং মূল ডেটা এবং নমুনাগুলি সঠিকভাবে সংরক্ষণ করুন।